内参基因（您的qPCR内参选对了吗？）

内参基因(你的qPCR对吗？)

实时定量PCR是在常规PCR的基础上，加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能。由于其具有较高的准确性和灵敏度，在分子生物学研究和医学研究中得到了广泛的应用，尤其是在基因表达差异分析方面。基因表达差异分析一般是比较某一特定基因在不同空样本或不同处理样本(药物处理、物理处理、化学处理等)之间的表达差异。).

当检测到一个基因的表达上调或下调时，我们不知道表达的差异是因为自身表达的变化，还是因为样本量或操作导致的RNA丢失等其他原因导致的表达变化。为了减少实验偏差和产生准确的表达水平，RT-qPCR往往需要考虑几个变量(如操作误差或RNA提取量、产量和变异等。)进行规范化。目前RT-qPCR标准化最常用的方法是利用内参基因进行均质化。

什么是内参基因？

理想地，内部参照基因在不同组织的所有样品中，在所有发育阶段和不同实验处理的反应中，应该具有相对稳定的表达水平。内参基因通常是各种看家基因，如ATCB、GAPDH、β-actin、18S rRNA等。它们的表达水平受环境因素影响较小，几乎在生物的所有组织和生长阶段都能持续表达。在不同的组织中，看家基因mRNA的含量非常丰富。

内部参照基因的作用

在基因表达差异分析中，可以利用内参基因来修正加载量和加载过程中的实验误差，从而保证实验结果的准确性。通过检测每个样品中内参的量，可以用来修正上样误差，使定量结果更加可靠。一般来说，应选择在治疗因素的条件下其表达不会改变的基因作为内部参照。

理想的内参基因应满足以下条件:

1.没有假基因，避免基因DNA的扩增；

2.高或中等表达，不包括低表达；

3.在不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)中稳定表达，且其表达水平相近，无显著差异；

4.表达水平与细胞周期和活化无关。

5.其稳定表达水平与目的基因相似；

6.不受任何内源性或外源性因素的影响，如任何实验性治疗措施。

内部参考基因的评估

然而，研究表明，一些用于控制实验偏差的传统内参基因仅在特定条件下具有相对恒定的表达水平。显然，内参基因具有一定的特异性，没有一个通用的内参基因可以用于所有实验的内部对照，这也说明在RT-qPCR实验之前必须正确选择内参基因。然后，在选择内参基因时，可以通过geNorm、BestKeeper、NormFinder、RefGenes等工具进行评估。，这是保证结果可靠准确的前提。其次，可以通过qPCR实验进一步筛选候选内参基因。优选在不同样品中稳定表达的内参基因，即比较每个样品中Cq平均值和Cq值的标准差，选择SD最小的基因作为实验内参。

现在了解内参基因的选择吗？

天青实时荧光定量PCR系统

Azure实时荧光定量PCR系统来自美国Azure Biosystems，可为您提供3/6检测通道，可根据实验要求灵活配置。本产品采用高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；作为温度控制系统，高品质的帕尔贴温度模块具有快速的升温和降温速率，可设置12列温度梯度，跨度为30℃；优秀的CMOS摄像头+光纤信号传输作为探测系统，CMOS探测灵敏度高，光纤传输速度快，没有光损耗和噪声干扰，不需要ROX标定。天蓝色实时荧光定量PCR系统可为您的科研提供高精度、高灵敏度、高可靠性的实验结果。

以上就是由优质生活领域创作者 嘉文社百科网小编 整理编辑的，如果觉得有帮助欢迎收藏转发~