琼脂糖电泳（琼脂糖电泳原理）

今天给大家分享一个关于琼脂糖电泳的问题(琼脂糖电泳的原理)。以下是边肖对这个问题的总结。让我们来看看。

1。琼脂糖凝胶电泳的原理是什么？

琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为介质，分离不同大小的DNA或RNA的电泳方法。琼脂糖是一种多糖，亲水但不带电。

在碱性条件下，DNA带负电(pH8.0缓冲液)，在电流的作用下，以琼脂糖凝胶为介质从负极向正极移动。根据不同DNA分子片段的大小和形状，在电场中的游动速度是不同的。同时，在样品中加入染料，可以与DNA分子形成复合物，经紫外线照射后可以看到DNA的位置，从而达到分离鉴定的目的。

琼脂糖凝胶电泳的注意事项

底板一定要用胶带封好，不然倒胶的时候凝胶会漏出来。可以在灌胶前在交接处倒少量凝胶，用凝固的凝胶密封严密。

梳子切不可插入底部，离底部1-2mm为宜，否则梳子拔出时容易破胶，造成漏胶。加热时，要注意不要让琼脂糖沸腾得太厉害，直到溶液冷却，也就是完全溶解。过度煮沸会导致凝胶实际浓度的增加。

凝胶放入电泳槽时注意极性，不要正负极接反。应注意撕掉两端的密封带。凝胶的浓度与要分离的DNA的大小有关。一般浓度是1%，浓度低的胶特别易碎，要注意。

二、琼脂糖凝胶电泳的原理

三。琼脂糖凝胶电泳的原理

四、琼脂糖凝胶电泳的原理是什么

琼脂糖凝胶电泳原理:琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和鉴定DNA和RNA分子混合物的方法。这种电泳方法以琼脂糖凝胶为支持物，利用DNA分子在游动过程中的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。

DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电荷，并在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。

不同构型的DNA分子迁移速度不同。例如，环状DNA分子样品，其中有三种分子构型:共价闭合环状超螺旋分子(cccDNA)、开环分子(ocDNA)和线性DNA分子(IDNA)。这三种不同构型的分子在电泳过程中的迁移速度顺序为CCCNA > IDNA > OCDNA。

核酸分子是两性解离分子，pH3.5是碱基上的氨基解离，三个磷酸基团中只有一个解离，所以分子带正电，在电场中向负极游去。但在pH8.0-8.3时，碱基几乎不可分，而磷酸基团游离，所以核酸分子带负电，在电场中向正极游去。

不同核酸分子的电荷密度几乎相同，所以对游泳速度影响不大。中性或碱性时，单链DNA的迁移率几乎与相同长度的双链DNA相同。

扩展数据

影响核酸分子流动性的因素

1、样品的物理性质

即分子大小、电荷数、粒子形状和空构型。一般来说，电荷密度越大，游动速率越大。而不同核酸分子的电荷密度几乎相同，所以对迁移率的影响并不明显。

对于线性分子，分子量的常用对数与游泳速度成反比。用此标准样品进行电泳并测定其游动速率，然后以DNA分子长度(BP)-游动距离的负对数作为标准曲线，就可以用来测定未知分子的长度。

DNA分子的空构型对迁移率有很大影响。例如，质粒分子的迁移率顺序为cDNA > cDNA>IDNA>ocDNA。但由于琼脂糖浓度、电场强度、离子强度和溴化乙锭的影响，会出现相反的情况。

2.支持介质

核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糖是带有高分子链的线性分子。含有不同浓度琼脂糖的凝胶组成的分子筛具有不同的筛孔大小，用于分离不同浓度范围的核酸分子。聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(Acr)在N，N，N′-四甲基四乙烯四胺(TEMED)和过硫酸铵(AP)的催化下聚合而成，由N，N′-亚甲基双丙烯酰胺(Bis)交联而成。筛目尺寸由Acr与Bis的相对比例决定。

琼脂糖凝胶适用于分离长度为100到60的分子，而聚丙烯酰胺凝胶最适合分离小片段(5bp-500bp)。选择不同浓度的凝胶可以分离不同大小的DNA分子。

3.电场强度

电场强度越大，一些粒子的游动速度越快。而凝胶的有效分离范围随着电压的升高而减小，所以电泳一般采用低电压，不超过4V/cm。然而，对于大片段电泳，甚至使用0.5-1.0V/cm电泳过夜。只有聚丙烯酰胺凝胶可以用于高压电泳。

4.缓冲溶液的离子强度

核酸电泳中常用三种缓冲体系，TAE、TBE和TPE，但它们各有优缺点。TAE便宜，但缓冲能力低，需要循环双极缓冲。TPE回收DNA时会污染磷酸盐，影响后续反应。因此，经常使用缓冲剂。

在缓冲液中加入EDTA可以螯合二价离子，抑制DNA酶，保护DNA。

缓冲液的pH值通常是碱性或中性的，此时，核酸分子带负电并向正极移动。

溴化乙锭(EB)是核酸电泳中常用的染色剂。溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入双链核酸的成对碱基之间。当BE-DNA复合物被紫外线照射时，出现不同的效应。

254nm紫外线照射时，灵敏度最高，但DNA损伤严重；用360nm紫外线照射时，灵敏度较低，但对DNA的损伤较小，适用于DNA样品的观察和回收。300nm紫外线照射的灵敏度高，对DNA的损伤也不大，所以也适用。

用溴化乙锭对DNA样品进行染色，可在凝胶中加入终浓度为0.5μg/ml的EB。当EB混入DNA分子时，在电泳过程中随时可以观察到核酸的迁移。但如果要测定核酸分子的大小，就不能用上述方法，而应在电泳后将凝胶浸泡在含0.5μg/mlEB的溶液中10 ~ 30 min。BE会被光分解，应在4℃避光保存。

参考:百度百科-琼脂糖凝胶电泳

参考:百度百科-凝胶电泳

以上是边肖对琼脂糖电泳(琼脂糖电泳原理)及相关问题的回答。希望关于琼脂糖电泳(琼脂糖电泳原理)的问题对你有用！

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