蛋白检测（蛋白检测仪）

今天给大家分享一下蛋白质检测的知识，蛋白质检测仪来讲解。如果你能意外解决你面临的问题，别忘了关注这个网站，所以现在就开始吧！

蛋白质测试实验步骤

选择高蛋白的食物浆，如豆浆、蛋清等。然后制备检测蛋白质的双缩脲试剂，由溶液A和溶液b组成，溶液A为质量分数为0.1 g/mL的氢氧化钠水溶液。b:硫酸铜质量分数为0.01克/毫升的水溶液。

在实验中，需要在待测液体中加入A液，创造一个碱性环境，满足B液与蛋白质反应的条件，以利于蛋白质的检测。一段时间后，如果试管中的液体变成紫色，说明待测液体中含有蛋白质，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

扩展信息:

蛋白质检验的注意事项:

用户应该注意样本应该是均匀的。如果是固体样品，要提前研磨过筛，液体样品要混合均匀。

当样品放入凯氏烧瓶时，不要粘在瓶颈上。如遇粘连，可用少量水慢慢冲洗，以免被测样品消化不完全，结果偏低。

如果称1g以上的样品，最小K瓶500ml，800~1000ml更好。这种K型烧瓶在缩短氨化时间、加热均匀性和氨化完全性方面效果最好。

百度蛋白浓度的测定

如何测量食物中蛋白质的含量？

蛋白质含量的七种测定方法

一、紫外直接测定法

这种方法在280nm波长处直接检测蛋白质。选择Warburg公式，光度计可以直接显示样品的浓度，或者选择相应的换算方法将吸光度值换算成样品的浓度。蛋白质的测定过程非常简单。先测空白色溶液，再直接测蛋白质。所以结果很不稳定。蛋白质直接定量法适用于检测成分相对单一的纯蛋白质。与比色法相比，紫外直接定量法快速、易操作。但易受平行物质干扰，如DNA灵敏度低，蛋白质浓度高。

二、紫外线吸收法

蛋白质的分子结构中大多含有芳香族氨基酸残基(酪氨酸和色氨酸)，使得蛋白质在280nm的紫外区有最大吸收，在这个波长范围内的吸收值与蛋白质的浓度成正比。这一特性可用于定量测定蛋白质的含量。

0.1-0.5 mg/ml蛋白质溶液可用紫外吸收法测定。该方法简单、快速、不消耗样品。低浓度盐不干扰测定。因此，这种方法被广泛应用于蛋白质的制备。

三个。联二脲法

NH3CONHCONH3是两分子尿素在180℃左右加热的产物，释放出一分子氨。在强碱性溶液中，缩二脲与CuSO4形成紫色络合物，称为缩二脲试验。凡有两个酰胺基或两个直接相连的肽键，或可以通过中间碳原子相连的肽键，这些化合物都有缩二脲试验。紫色络合物的颜色与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量和氨基酸组成无关，因此可以用来测定蛋白质的含量。测定范围为1 ~ 10毫克蛋白质。主要干扰物质为硫酸铵、Tris缓冲液和一些氨基酸。

这种方法的优点是速度更快，不同蛋白质产生的色度相近，干扰物质更少。主要缺点是灵敏度差。因此，双缩脲法经常用于需要快速但不是非常准确的蛋白质测定。

四个。BCA方法

BCA分析是对劳里分析的改进。与Lowry法相比，BCA法具有操作更简单、试剂更稳定、几乎不含干扰物质、灵敏度更高(微量检测可达0.5μg/ml)、应用更灵活等优点。

蛋白质分子中的肽键在碱性条件下可与Cu2+形成复合物，Cu2+可被还原为Cu+。喹啉羧酸及其钠盐是水溶性化合物，在碱性条件下能与Cu+结合生成深紫色化合物。这种稳定的化合物在562nm处有很强的吸收值，化合物的颜色与蛋白质的浓度成正比。因此，蛋白质的含量可以通过比色法来测定。

五、劳里法

在蛋白质的碱性溶液中，其肽键与Cu2+螯合形成蛋白质-铜络合物，还原酚试剂的磷钼酸形成蓝色化合物。在一定条件下，以蓝色深度与蛋白质浓度的线性关系作为标准曲线，确定样品中蛋白质的浓度。

6.考马斯亮蓝法

科斯亮蓝法是利用蛋白质-染料结合原理定量测定微量蛋白质浓度的一种快速、灵敏的方法。

科西嘉蓝G-250有两种不同的颜色形式:红色和蓝色。它通过范德华力与蛋白质结合。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质与染料的结合符合比尔定律。该染料与蛋白质结合后，颜色为红蓝色，最大光吸收从465nm变为595nm。通过测量595nm处光吸收的增加，可以知道与染料结合的蛋白质的量。

comb 2与蛋白染料结合是一个快速的过程，2分钟左右就可以完成反应，表现出最大的光吸收，可以稳定1小时。此后，蛋白质-染料复合物聚合并沉淀。蛋白质-染料化合物具有高的消光系数，这使得它对测定蛋白质的浓度非常敏感。当溶液中含有蛋白质5L/mL时，光吸收值变化0.275，比Lowry的方法灵敏4倍。量程为10-100 g蛋白，微量量程为1-10 g蛋白。该反应重复性好，准确度高，线性关系好。当蛋白质浓度较高时，标准曲线略微弯曲。这是因为染料本身的两种颜色形式的光谱重叠。随着更多的染料与蛋白质结合，试剂的背景值降低，但直线弯曲的程度很轻，不影响测定。

这种方法干扰少。研究表明，氯化钠、KCl、氯化镁、乙醇和(NH4)2SO4无干扰。强碱缓冲液对测定有一定的颜色干扰，可用适当的缓冲液扣除。Tris、乙酸、2-巯基乙醇、蔗糖、甘油、EDTA和少量洗涤剂如Triton X―100、SDS和玻璃洗涤剂有少量的颜色干扰，用适当的缓冲液可以很容易地除去。大量洗涤剂的存在对颜色影响很大，不易消除。

七、凯氏定氮法

凯氏定氮法用于测定有机物的氮含量。如果已知蛋白质中的氮含量，这种方法可以用来测定样品中蛋白质的含量。

当蛋白质用浓硫酸加热时，碳和氢被氧化成二氧化碳和水，而氮被转化成氨，氨进一步与硫酸反应生成硫酸铵。这个过程通常被称为“消化”。但这个反应比较慢，所以通常需要加入硫酸钾或硫酸钠来提高反应溶液的沸点，硫酸铜作为催化剂来促进反应。

消化后，在凯氏定氮仪中加入浓碱可分解消化液中的硫酸铵和游离氨。借助水蒸气蒸馏，产生的氨被蒸馏成一定量和浓度的硼酸溶液。硼酸吸收氨后，氨与溶液中的氢离子结合，降低溶液中氢离子的浓度，改变指示剂的颜色。然后，用标准无机盐酸滴定，直到溶液中原来的氢离子浓度恢复。根据所用标准盐酸的量，可以计算出样品中的总氮含量。

蛋白质中含氮量为16%，即蛋白质中1克氮相当于6.25克蛋白质。用凯氏定氮法测得的氮含量乘以6.25，得到样品中的蛋白质含量。

理科实验——蛋白质测试怎么做？

检测蛋白质最简单的方法是双缩脲试剂。具体来说，需要0.1g/ml的氢氧化钠和0.01g/ml的硫酸铜溶液。使用时，应先加入1毫升氢氧化钠。然后滴三四滴硫酸铜溶液。最后，不加热也能观察到蛋白质的紫色，可以证明蛋白质的存在。

检测蛋白质的方法有哪些？检测蛋白质的方法有哪些？

1.凯氏定氮法

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮含量的方法。即在催化剂的存在下，样品中的有机氮用浓硫酸消化转化为无机铵盐，然后铵盐在碱性条件下转化为氨，用水蒸气蒸馏，用过量的硼酸溶液吸收，用标准盐酸滴定，计算出样品中的氮含量。

由于蛋白质中的氮含量是相对恒定的，蛋白质的含量可以由它的氮含量计算出来，所以这种方法是一种经典的蛋白质定量方法。

2.缩二脲法

缩二脲法是一种用于鉴定蛋白质的分析方法。缩二脲试剂是一种碱性含铜试液，颜色为蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。

当底物含有肽键(多肽)时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。浓度可通过比色法分析，紫外-可见光谱中的波长为540nm。识别反应的灵敏度为5-160毫克/毫升。反应蛋白单位为1-10毫克。

3.苯酚试剂法

取6支试管，分别贴上标签。前五个试管中加入了不同浓度的标准蛋白质溶液。最后一个试管加的是待测蛋白液，没有标准蛋白液。在室温下放置30分钟。取第一个无蛋白溶液的试管作为空白色对照，在650nm波长处测量每个试管中溶液的吸光度。

4.紫外线吸收法

大多数蛋白质在280nm波长处具有特征性的最大吸收，这是由于蛋白质中存在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。可用于测定0.1 ~ 0.5 mg/ml蛋白质溶液的含量。

取9支试管，分别贴上标签。前八个试管加入不同浓度的标准蛋白溶液，第一个试管不加入标准蛋白溶液，最后一个试管加入待测蛋白溶液，不加入标准蛋白溶液。每个试管中的液体总量是通过加入蒸馏水来保持不变而制成的。将液体混合均匀，在280nm波长下进行比色分析，记录吸光度值。

5.考马斯亮蓝法

考马斯亮蓝显色法的基本原理是蛋白质能与考马斯亮蓝G-250定量结合。当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合时，可见光的最大吸收峰从465nm变为595nm。

当考马斯亮蓝G-250的浓度过量且恒定时，溶液中蛋白质的浓度不同时，不同量的考马斯亮蓝G-250会从465nm的吸收峰形式变为595nm的吸收峰形式，有一定的定量关系。

一般来说，当溶液中蛋白质的浓度增加时，显色溶液在595nm处的吸光度基本可以线性增加。因此，考马斯亮蓝G-250可用于测定溶液中蛋白质的含量。

检测蛋白质的步骤

没有蛋白质我们无法生存。在这里，我将带你学习检测蛋白质的步骤。

01

第一，选择高蛋白的食物浆，如豆浆、蛋清等。然后制备检测蛋白质的双缩脲试剂，由溶液A和溶液b组成，溶液A为质量分数为0.1 g/mL的氢氧化钠水溶液。b:硫酸铜质量分数为0.01克/毫升的水溶液。

02

在实验中，需要在待测液体中加入A液，创造一个碱性环境，满足B液与蛋白质反应的条件，以利于蛋白质的检测。

03

加入1ml溶液A后，向试管中加入4滴溶液B，然后摇匀，观察其反应。

04

一段时间后，如果试管中的液体变成紫色，说明待测液体中含有蛋白质，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

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