今天给大家分享一下关于引物二聚体的问题(如何判断引物二聚体)。以下是边肖对这个问题的总结。让我们来看看。
1。什么是引物二聚体，对PCR反应有什么影响？
二、如何消除引物二聚体
第三，在PCR过程中，出现引物二聚体
一.引物设计和样品使用均是一样的情况，就是反应条件的问题
二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器，操作都一样的话，仪器设定上出问题的可能性会大一些，其中退货温度是比较关键的
三.人品问题也会导致这样的情况
四.一般减少引物二聚体的 *** ：
1.
从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法；
2.
可能模板有问题；
3.
模板浓度过小，适当加大模板量；
4.
Taq酶，引物，
Mg2
+浓度可能过高，可降低它们的浓度；
5.
取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的；
6.
所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性；
7.
PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体；
8.
增加循环数；
9.
降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；
10.
若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在
20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对；
11.
以上次的PCR产物作模板二次PCR，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍。
四。什么是引物二聚体引物二聚体简介
以上是边肖对引物二聚体(如何判断引物二聚体)及相关问题的回答。希望引物二聚体的问题(如何判断引物二聚体)对你有用！
以上就是由优质生活领域创作者 嘉文社百科网小编 整理编辑的，如果觉得有帮助欢迎收藏转发~
本文地址：https://www.jwshe.com/863924.html，转载请说明来源于：嘉文社百科网
声明：本站部分文章来自网络，如无特殊说明或标注，均为本站原创发布。如若本站内容侵犯了原著者的合法权益，可联系我们进行处理。分享目的仅供大家学习与参考,不代表本站立场。