凝胶色谱法（凝胶色谱法获得纤维素酶的原理）

今天给大家介绍一下凝胶色谱，以及凝胶色谱得到的纤维素酶原理对应的知识点。希望对你有帮助，也别忘了收藏这个网站。

凝胶色谱原理

凝胶色谱是20世纪60年代初发展起来的一种快速简便的分离分析技术。由于其设备简单，操作方便，不需要有机溶剂，对高分子材料具有很高的分离效果。凝胶色谱也称为分子排阻色谱。凝胶色谱主要用于聚合物相对分子质量的分级分析和相对分子质量分布的测试。目前，它已广泛应用于生物化学、分子生物学、生物工程、分子免疫学、医学等相关领域，不仅应用于科学实验研究，还可大规模应用于工业生产。根据分离对象是水溶性化合物还是可溶于有机溶剂的物质，凝胶色谱法可分为凝胶过滤色谱法(GFC)和凝胶渗透色谱法(GPC)。分离原理:当含有各种分子的样品溶液缓慢流过凝胶柱时，每个分子同时以两种不同的方式运动:垂直向下运动和不定向扩散运动。大分子由于直径较大，很难进入凝胶颗粒的微孔，只能分布在颗粒之间，所以洗脱时向下运动速度较快。小分子物质不仅可以在凝胶颗粒之间的空间隙中扩散，还可以进入凝胶颗粒的微孔，即凝胶相。在向下运动的过程中，它们从一个凝胶扩散到颗粒之间的空间隙，然后进入另一个凝胶颗粒。这种现象被称为分子筛效应。多孔凝胶是一种分子筛。各种分子筛的孔径分布有一定的范围，有最大值和最小值。如果分子直径大于凝胶的最大孔径，它将被完全排除在凝胶颗粒之外。这种情况叫做完全排斥。即使两个完全排斥的分子大小不同，也不可能有分离效应。直径小于凝胶最小孔径的分子可以进入凝胶的所有孔中。如果两种分子都能进入凝胶孔隙，即使大小不同，也不会有很好的分离效果。因此，某种分子筛有其一定的应用范围。第一，分子很小，可以进入分子筛的所有内部孔隙；第二，分子太大，根本无法进入凝胶的任何内部孔隙；第三，分子大小适中，能进入凝胶内孔的相应部分。大、中、小分子可以很容易地相互分离，但在不改变凝胶类型的情况下，很难将每个分子分离到凝胶分离范围之外。对于分子大小不同但属于凝胶分离范围的分子，在凝胶床中的分布是不同的:较大的分子只能进入孔径较大的凝胶孔，而较小的分子可以进入更多的凝胶颗粒，这样较大的分子在凝胶床中移动的距离较短，而较小的分子移动的距离较长。于是较大的分子先通过凝胶床，较小的分子通过凝胶床，这样不同分子量的物质就可以被分子筛分离。另外，凝胶本身具有三维网络结构，大分子通过这种网络结构的孔隙阻力大，小分子阻力小。当许多分子量不同的组分通过凝胶床时，按分子量排列，凝胶表现出分子筛效应。

凝胶色谱分离蛋白质的原理是什么？

凝胶色谱分离蛋白质的原理:由于蛋白质的形状、大小、吸附性质和亲和力不同，不同分子量的蛋白质通过多孔凝胶颗粒间隙的速度和路径长度也不同；分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的缝隙，距离短，流动快；分子量小的分子在多孔凝胶颗粒中的移动距离长，流动速度慢。

分子量是多少？

分子量，也叫相对分子质量，是化学式中每个原子的相对原子质量之和。对于一些结构复杂的生物大分子，常通过电泳、离心或色谱分析来确定其近似分子量。对于一些结构复杂的生物大分子，常通过电泳、离心或色谱分析来确定其近似分子量。

什么是凝胶色谱？

凝胶色谱也叫凝胶色谱技术，凝胶色谱也叫凝胶色谱技术。凝胶色谱主要用于聚合物相对分子量的分类分析和相对分子量分布的测试。当许多分子量不同的组分通过凝胶床时，按分子量排列，凝胶表现出分子筛效应。

凝胶色谱简介

凝胶色谱又称凝胶色谱技术，是20世纪60年代初发展起来的一种快速、简便的分离分析技术。由于其设备简单，操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱也称为分子排阻色谱。凝胶色谱主要用于聚合物相对分子质量的分级分析和相对分子质量分布的测试。根据分离对象是水溶性化合物还是有机溶剂可溶性物质，可分为凝胶过滤色谱(GFC)和凝胶渗透色谱(GPC)。GFC通常用于分离水溶性大分子，如多糖。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱主要用于分析分离可溶性聚合物(聚苯乙烯、聚氯丁二烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)的相对分子量分布。).)在有机溶剂中。常用的凝胶是交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂是四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不仅可以用来分离和测定聚合物的相对分子量及其分布，而且可以根据所用凝胶填料的不同来分离油溶性和水溶性物质。相对分子量的分离范围从几百万到100以下。近年来，凝胶色谱也被广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但分子量相近的物质，用凝胶色谱无法完全分离纯化。凝胶色谱主要用于聚合物相对分子量的分类分析和相对分子量分布的测量。目前，它已广泛应用于生物化学、分子生物学、生物工程、分子免疫学、医学等相关领域，不仅应用于科学实验研究，还可大规模应用于工业生产。

凝胶色谱法介绍凝胶的类型和性质。

1.凝胶色谱又称凝胶过滤、凝胶色谱、凝胶渗透色谱、渗透色谱、分子筛色谱。

2.凝胶色谱是20世纪60年代初发展起来的一种快速简便的分离技术。由于其设备简单，操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前，它已广泛应用于生物化学、分子生物学、生物工程、分子免疫学、医学等相关领域，不仅应用于科学实验研究，还可大规模应用于工业生产。

3.凝胶的类型和性质

(1)交联葡聚糖凝胶(葡聚糖凝胶)

交联葡聚糖的商标是Sephadex。不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数字是凝胶产量的10倍。例如，G-25在膨胀时每克凝胶吸收2.5克水，每克胶水吸收200克水。交联葡聚糖凝胶的类型有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150和G-200。因此，“G”反映了凝胶的交联度、溶胀度和部分范围。

(2)2)Sephadex LH-20和Sephadex G-25的羧基丙基衍生物，可溶于水和亲脂性溶剂，用于分离水不溶性物质。

(3)琼脂糖凝胶:

商品名很多，比如Sepharose(瑞典，pharmacia)，Bio-Gel-A(美国Bio-Rad)等等。琼脂糖凝胶依靠糖链之间的次级链，如氢键，来维持网络结构，网络结构的密度取决于琼脂糖的浓度。一般来说，它的结构是稳定的，并且它可以在许多条件下使用(例如水、pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始熔化，因此可以用化学灭菌法代替高压灭菌法处理。

(4)聚丙烯酰胺凝胶:

它是一种合成凝胶，由亚甲基双丙烯酰胺以丙烯酰胺为单元交联而成。可以通过干燥、粉碎或加工来制备颗粒，并且可以通过控制交联剂的量来制备各种类型的凝胶。交联剂越多，孔越小。聚丙烯酰胺凝胶-P (Bio-Gel P，美国Bio-Rad工厂生产)是一种商品。有很多型号，从P-2到P-300，P乘以1000的个数相当于凝胶的排阻极限。

(5) Styrogel，商用聚苯乙烯凝胶，具有较大的网络结构，可用于分离分子量为1600万~ 4000万的生物大分子，适用于有机聚合物、分子量测定和脂溶性天然产物的分类。凝胶具有良好的机械强度，甲基亚砜可用作洗脱剂。

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