菌种保存（菌种保存的方法有哪些）

今天给大家分享几个关于菌种保存的问题(菌种保存的方法有哪些)。以下是这个问题的总结。希望对你有帮助。让我们看一看。

1.菌种保存

两个。菌种的保存方法有哪些

三个。菌种常见的保存方法有哪些？

菌种保存是食用菌产业的一项基础工作，是保证野生种质资源基因保留和现有生产种遗传性能相对稳定的必要手段。菌种保存的方法有很多，有些是有效的，但投资高或操作复杂。在生产实践中，更需要使用设备投入少的简单方法，既能保证菌种不死亡，不被污染，又能最大限度地保留优良种，如斜面低温短期保存和天然基质长期保存相结合。

一般来说，母种保存时间长，原种保存时间短。要保证优良菌株的特性和活力不发生变化、不死亡、不被污染，保证其纯度。因此，保存方法应具有取材容易、操作方便、菌种不易降解、长期保存不污染杂菌等优点。菌种的常见保存方法如下:

(1)倾斜低温保存。这种方法的优点是存储方便，占用空间小空。具体方法是:菌丝盖在斜面上后，0 ~ 5℃保存。之后会定期转(2 ~ 3个月)。PDA培养基不能用于长期保存，否则物种容易退化，灰树花降解木质纤维素的能力减弱。所以每隔一段时间(一年左右)要将菌种转移到木屑培养基上复壮，然后挑选健康无污染的菌丝，转回PDA培养基上保存。在长期保存过程中，要防止卫生棉条受潮，滋生杂菌。最好用蜡封住试管口，防止培养基中的水分蒸发过快。增加琼脂的用量(2.5% ~ 3%)可以减缓水分的蒸发。还要防止菌种管上的标签脱落，造成菌种混杂。

低温保存方法简单易行，可随时观察保存菌株的活力和纯度。一旦被污染，肉眼可以及时发现。

(二)天然底物的保存该方法是根据灰树花的特性，利用天然底物保存灰树花菌株的方法。灰树花是一种木腐菌，可用于以木屑为主要原料的培养基中。天然基质营养丰富，且多为缓释营养，不易产生营养过剩或饥饿感。其次，培养基的理化性质好，能吸收或缓冲菌丝体代谢的有害物质。而且有些菌丝生长在基质中，不与空空空气接触，所以菌丝呼吸强度低，生命力强。

1.原料与粗、细木屑的比例合适。栗子锯末最好。粗锯末的粒径在2mm左右，细锯末一般为圆盘状锯末。粗木屑与细木屑的比例为1∶2，添加麦麸(干木屑重量的20%)和糖(1%)。水分含量在60%左右。这种基质通气性好，营养丰富，菌丝分解利用时间长。生长在基质内的菌丝体比包裹在基质外并暴露于空空气体的菌丝体更耐受。不同粒径基质的适当比例也能协调气水矛盾。粗粮太多，菌丝太多空；细粒太多，透气性差，菌丝生长慢。应用公式如下:

将78%的板栗木屑、20%的麸皮、1%的石膏、1%的蔗糖和65%的水混合，放入较粗的试管中。1/3 ~ 1/2的试管，1.5公斤/平方厘米灭菌1.5小时。待冷却后，接种待保存的菌种，28℃培养，待菌丝满木屑培养基时取出，换上无菌胶塞，置于0 ~ 5℃冰箱中保存1 ~ 2年。

2.容器及其容量应为容量为250ml的葡萄糖玻璃瓶，并应清洗干净。一般情况下，容量不得超过玻璃瓶容量的3/5。填充物不能太满，瓶壁上残留的颗粒要擦拭干净，否则保存下来的菌种容易造成污染。

3.如果采用棉球灭菌和冷藏灭菌，基质表层容易失水，接种成活率低。即使菌丝复活，也会慢慢生长。最好用聚丙烯薄膜密封。接种后，用无菌棉塞培养，菌丝饱满后，放入有孔无菌胶塞冰箱保存。

用上述方法保存的菌株，保存三年后，存活率在90%以上，出菇量和子实体形态特征无明显变化。因此，本发明具有保存期长、菌株遗传性能相对稳定的特点。

(3)贮存在木质PDA斜坡上的灰树花在自然状态下容易发生在栗树根部，表明其特殊的营养需求。根据灰树花的这一习性，在PDA中添加适量的板栗种子制成母种培养基。经过多年使用，发现用此培养基培养的母种生长势好，适应性强，转原种时萌发定殖快。用作菌种保藏的基质，保藏时间长，能很好地保持菌种的优良特性。

1.木质PDA的制作选用板栗边材，加工成0.3 ~ 0.5cm的颗粒，晾干或及时晾干备用。称取10 g葡萄糖和41 g KH2PO，溶于1升清水中，制成营养液。将营养液倒入盛有木质颗粒的小铝锅内，营养液以完全浸没木质颗粒为准。煮沸10分钟加速木粒吸收营养液，让木粒吸收营养液30分钟。取出木粒，沥干表面水分，放入试管中，量为试管长度的1/6，最多不超过试管长度的1/5。否则，木材颗粒不容易均匀地分散在倾斜表面上。

选取新鲜土豆，去皮切片，称200g，放入小铝锅内，加入1升清水，小火煨30分钟，趁热过滤，补足1升的体积。称取20克琼脂、20克葡萄糖、2克kh2po 4和2克硫酸镁47 H2O。将琼脂切成块，加入土豆滤液中，继续用文火加热，使琼脂溶解。琼脂完全溶解后，加入称好的其他三种营养物质，搅拌使这些物质溶解均匀，趁热放入带木块的试管中，放入试管长度的1/3，塞好棉塞。

在0.8 ~ 1kg/cm2的蒸气压下灭菌40分钟，气压降至0时开盖取出，趁热轻轻摇动试管，使木粒分散成斜面，木粒以半裸状态分布在斜面上。固化后，制成木质颗粒PDA培养基。

2.生长保存效果:木PDA斜面上培养的灰树花母种菌丝生长迅速，长势良好，12天即可装满试管，但后期菌丝生长更旺盛，密度更大，后劲更足。该菌株适应性强，转原种定殖快。这表明灰树花菌丝体的生长速度和潜力不仅取决于其自身的遗传，而且在很大程度上取决于培养基的营养。常规PDA的营养成分主要是可溶性速效营养，前期营养丰富，可以直接使用。所以前期菌丝长得快，长得好，后期营养不足，菌丝长得差。由于在PDA中添加了木纹的缓效营养，对于木腐菌灰树花来说，营养搭配合理，补充了菌丝生长后期所需的营养，后劲足。

菌丝体分泌的胞外酶将大分子营养物质分解成小分子营养物质，然后被吸收利用。这些胞外酶多为诱导酶，其合成和分泌受底物诱导和分解产物阻遏机制的调控。就纤维素酶而言，许多易代谢的碳源(如葡萄糖等。)对酶合成有抑制作用。同时，随着菌丝体的旺盛生长，在易代谢的碳源基本耗尽后，大量的酶被基质纤维素合成和诱导。当常规PDA底物、葡萄糖等代谢碳源基本耗尽时，由于营养缺乏，菌丝生理功能下降，合成的酶量减少。然而，木质颗粒PDA不仅含有葡萄糖这种易于代谢的碳源，还含有木质颗粒这种缓慢作用的营养物质。前期葡萄糖促进菌丝生长旺盛，获得大量菌丝，呈粗而密的菌丝。在易代谢碳源耗尽的后期，木纹一方面补充后期所需的营养，使菌丝的埋藏功能保持在一定水平；另一方面，木材颗粒的纤维素激活了菌丝体细胞中纤维素酶的诱导机制，合成了大量的酶，保持了腐生灰树花强大的木材分解能力。因此，在这种培养基上培养的亲本种子适应性强，转移到原种上萌发定殖快。由于部分菌丝长成木纹，抗逆环境的生存能力增强，种质不易退化。PDA灰树花菌株在0 ~ 5℃保存2 ~ 3年后，再进行体外活化，存活率仍在90%左右。此外，木质颗粒PDA在木腐灰树花提纯复壮中的应用也取得了令人满意的效果。

(4)隔氧密封石蜡的具体方法是将液体石蜡装入三角瓶中，灌装量达到瓶的1/3空，用棉塞塞紧，121℃灭菌2小时，然后放入40℃培养箱中蒸发水分，或放入干燥器中干燥数日除去水分。石蜡优选是透明的。在无菌条件下，将菌丝体放入装有无菌吸管的倾斜试管中，使液面高出斜面顶部1cm左右。塞住无菌橡胶塞，垂直存放。这种方法可使菌种存活3年以上，但最好每1 ~ 2年移植一次。移栽时不用倒石蜡，用接种钩取一片菌丝体即可。由于转移中有石蜡，菌丝生长较弱，需要再次转移1 ~ 2次才能复壮。

这是菌种保藏问题(菌种保藏的方法有哪些)及相关问题的答案。希望菌种保存的问题(菌种保存的方法有哪些)对你有用！

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