pcr原理（pcr原理和过程）

今天和大家分享一些关于pcr原理(pcr的原理和过程)的问题。以下是边肖对这一问题的总结。让我们来看看。

1。PCR的基本原理是什么？基本流程是什么？

一、基本原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的自然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保守复制是生物进化和传代的重要方式。双链DNA可以在多种酶的作用下变性并解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对的原理复制成同一个两分子拷贝。

实验中发现，DNA在高温下可以变性熔化，降温时可以重折叠成双链。因此，DNA的变性和复性可以通过温度变化来控制，DNA聚合酶和dNTP可以通过添加设计好的引物来完成特定基因的体外复制。

2.PCR由三个基本反应步骤组成:变性-退火-延伸:

1.模板DNA的变性:将模板DNA加热到93℃左右一定时间后，模板DNA的双链DNA或PCR扩增形成的双链DNA解离下来，以便与引物结合，为下一轮反应做准备。

2.模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA加热变性成单链后，降温至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对。

3.引物延伸:DNA模板-引物偶联物在72℃下，在DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，根据碱基互补配对和半保守复制的原理，合成一条与模板DNA链互补的新的半保守复制链。

重复循环变性-退火-延伸三个过程可以得到更多的“半保守复制链”，这个新链可以成为下一个循环的模板。完成一个循环需要2 ~ 4分钟，待扩增的目的基因在2 ~ 3小时内可扩增百万倍。

扩展数据:

在实践中，聚合酶链式反应(PCR)可能由于各种原因而失败，部分原因是其对污染的敏感性，这导致错误DNA产物的扩增。正因为如此，人们发展了一些技术和步骤来优化聚合酶链式反应的条件。将聚合酶链式反应前的混合物与潜在的DNA污染物分离的实验室方案和过程解决了外来DNA污染的问题。

这通常包括整理出聚合酶链式反应的设定区域或从该区域纯化聚合酶链式反应的产物用于分析，使用一次性塑料制品，彻底清洁反应装置之间的工作台。引物设计技术对于提高聚合酶链式反应产物的产量和避免杂质的形成非常重要。

使用替代的缓冲组分和聚合酶有助于扩增较长或有其他问题的DNA区域。在缓冲系统中加入甲酰胺等试剂可以提高聚合酶链式反应的特异性和产量。计算机模拟理论可以用来模拟聚合酶链式反应(电子聚合酶链式反应)的结果，辅助引物设计。

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