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双缩脲试剂检测蛋白质的原理
缩二脲试剂的配制:将10g氢氧化钠置于量筒中,加水至100mL,充分溶解后倒入试剂瓶中,配制成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液。用橡皮塞塞住瓶子,贴上标签,写上试剂a。
将1g硫酸铜置于量筒中,加水至100mL,充分溶解,倒入试剂瓶中,制成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。
用橡皮塞塞住瓶子,贴上标签,写上试剂b,蛋白质的具体反应是与缩二脲试剂反应产生紫色反应。
缩二脲法原理
缩二脲试验原理:缩二脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中能与铜离子形成紫红色络合物。这个反应叫缩二脲试验,主要涉及肽键。尿素含有肽键样结构,能与铜离子形成紫红色络合物。缩二脲试剂由缩二脲试剂A和缩二脲试剂B组成,缩二脲试剂A是氢氧化钠质量分数为0.1 g/mL的水溶液。缩二脲试剂B是硫酸铜质量分数为0.01 g/mL的水溶液。缩二脲试剂可以验证蛋白质的存在。尿素不含蛋白质,所以尿素不能与缩二脲试剂反应。
为什么缩二脲能和蛋白质反应产生紫色?
蛋白质是由几个肽链组成的,组成蛋白质的肽链是由很多氨基酸组成的。这些氨基酸每两个通过脱水缩合形成一个酰胺键,缩二脲试剂与这个酰胺键反应。这是蛋白质与缩二脲发生颜色反应的直接化学原因。
缩二脲试剂可以检验二肽吗?
不能
联二脲是由两个尿素分子缩合而成的化合物(H2n-Co-NH-Co-NH2)。该化合物含有—CO—NH结构,与蛋白质或肽的肽键结构相同。同时,一分子氨被释放出来。
缩二脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应生成紫色络合物,称为缩二脲试验;一定浓度的氢氧化钠和硫酸铜溶液称为缩二脲试剂。
蛋白质中含有许多类似缩二脲的肽键,因此也可作为缩二脲试验。是缩二脲试验肽与蛋白质的独特反应,而不是氨基酸的独特反应。
一般含两个或两个以上肽键的化合物可用硫酸铜碱性溶液进行缩二脲试验,
以鉴定蛋白质的存在;另外,利用这个反应,可以用分光光度计测定蛋白质的含量。
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