双缩脲试剂检测蛋白质原理（双缩脲试剂检测蛋白质原理实验报告）

缩二脲试剂的配制:将10g氢氧化钠置于量筒中，加水至100mL，充分溶解后，倒入试剂瓶中，配制成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液。用橡皮塞塞住瓶口，贴上标签，写上试剂a。

将1g硫酸铜置于量筒中，加水至100mL，充分溶解后，倒入试剂瓶中，制成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。

用胶塞塞住瓶口，贴上标签，写上试剂b，蛋白质的具体反应是与缩二脲试剂反应产生紫色反应。

缩二脲试验原理:缩二脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中能与铜离子形成紫色络合物。这个反应叫做缩二脲试验。缩二脲试验主要涉及肽键。尿素具有类似肽键的结构，能与铜离子形成紫红色络合物。缩二脲试剂由缩二脲试剂A和缩二脲试剂b组成，缩二脲试剂A是氢氧化钠质量分数为0.1 g/mL的水溶液。缩二脲试剂B是硫酸铜质量分数为0.01 g/mL的水溶液。缩二脲试剂可以验证蛋白质的存在。尿素不含蛋白质，所以不能与缩二脲试剂反应。

双缩脲试剂中没有蛋白质，所以蛋白质的浓度为0。缩二脲试剂A是氢氧化钠质量分数为0.1g/mL的水溶液；缩二脲试剂B硫酸铜的质量分数为0.01g/mL水溶液。首先将缩二脲试剂A3mL加入3mL组织样本溶液中，摇匀(必须创造碱性环境)。然后加入2~3滴缩二脲试剂B，摇匀。如果组织含有蛋白质，你会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物可与紫色缩二脲试剂反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中可与Cu2+络合形成紫红色络合物。颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。双缩脲法的测定范围可达1~10mg蛋白质，操作简单快捷。

根据实验原理，蛋白质在碱性条件下与二价铜离子反应生成紫色物质，从而检测出蛋白质的含量。

硫酸铜是缩二脲试剂的真正作用，而氢氧化钾只是用来提供碱性环境。因此，使用缩二脲试剂时，必须先加入0.1g/mL的氢氧化钠溶液，再加入0.01g/mL的硫酸铜水溶液。

如果先加入硫酸铜溶液，再加入氢氧化钠溶液，则不能完全制造碱性环境。此时硫酸铜与氢氧化钠会发生复分解反应，产生蓝色氢氧化铜沉淀，导致出现不清现象，达不到实验目的。

菲试剂和缩二脲试剂都是由NaOH溶液和CuSO4溶液组成，但它们之间有三个区别:

(1)溶液浓度不同

燃烧试剂中的NaOH溶液称为燃烧试剂A，浓度为0.1g/ml，CuSO4溶液称为燃烧试剂B，浓度为0.05g/ml；；；缩二脲试剂中NaOH溶液(缩二脲试剂A)和CuSO4溶液(缩二脲试剂B)的浓度分别为0.1g/ml和0.01g/ml。

(2)使用原理不同。

燃烧试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，在加热条件下与醛基反应，还原成砖红色的Cu2O沉淀，可用于鉴别可溶性还原糖的存在。用灼烧试剂鉴别可溶性还原糖时，溶液变色过程为浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。

在鉴定生物组织是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，用双缩脲试剂进行双缩脲试验。缩二脲试验的本质是Cu2+在碱性环境下与缩二脲试剂反应呈紫色。蛋白质分子中含有许多与缩二脲(H2NOC-NH-CONH2)结构相似的肽键，因此蛋白质可以与缩二脲试剂反应，通过缩二脲试剂可以鉴定蛋白质的存在。

(3)使用方法不同。

使用森林试剂时，先将NaOH溶液与CuSO4溶液混合(将4 ~ 5滴CuSO4溶液滴入2mL NaOH溶液中)，然后立即使用:使用缩二脲试剂时，先加入NaOH溶液(2mL)，摇匀，创造碱性反应环境，再加入3~4滴CuSO4溶液，摇匀，观察现象。

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